酶联免疫吸附测定（ELISA）自1971年由Engvall等人首创以来，逐步发展成为生物医学研究不可或缺的技术工具。ELISA基于免疫化学方法，通过固相免疫测定有效检测体液中微量且关键的生物标志物。继免疫荧光和放射免疫技术之后，ELISA凭借其独特优势，迅速在临床检验领域占据重要地位。

ELISA的基本原理

ELISA是一种基于免疫反应的高灵敏度实验技术，其基本原理是利用抗原与抗体的特异性反应，结合酶催化底物的高效作用，以检测靶蛋白的含量。在实验过程中，抗原或捕获抗体会被固定在固相载体上，检测分子（如酶或荧光基团）将化学信号转换为电信号，通过光密度（OD值）或发光值进行靶蛋白的定量分析。

ELISA的分类

ELISA可以用于测定抗原和抗体，根据实验原理及操作的不同，ELISA主要分为四类：直接法、间接法、夹心法和竞争法。

1. 直接法（Direct ELISA）

在直接法中，抗原或抗体被固定到酶标板上，使用带有酶标记的一级抗体或一级抗原与之特异性结合，然后通过酶催化底物显色，测定总靶标蛋白的含量。

2. 间接法（Indirect ELISA）

间接法主要用于检测抗体。抗原首先被固定在酶标板上，然后加入抗体进行特异性结合，接着再加入带有酶标记的二抗，最终通过底物显色测定总靶标蛋白的含量。

3. 夹心法（Sandwich ELISA）

夹心法分为双抗体夹心法和双抗原夹心法，适用于检测多个识别位点的大分子蛋白等。双抗体夹心法将抗体固定在固相载体上，加入待测抗原，与抗体特异性结合，并通过酶标抗体检测实现显色，反映靶标蛋白的含量。双抗原夹心法类似，但用固相抗原和酶标特异性抗原进行替换，以测定样品中的抗体。

4. 竞争法（Competitive ELISA）

竞争法适合测定仅具一个识别位点的小分子物质。其原理是样本中的抗原与固相抗体竞争结合，抗原含量越高，结合的酶标抗原越少，显色也越浅，因此显色结果与待检抗原的量成反比。

四种ELISA方法的比较

了解ELISA的基本原理、分类及不同方法的特点，有助于根据实际需求选择最合适的检测方案，从而提高实验的准确性和效率。金年会金字招牌诚信至上，我们承诺始终为客户提供最高质量的服务与支持，为您的研究保驾护航。